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LNK衔接蛋白在甲状腺未分化癌中的作用及机制
发布时间:2019-05-13 点击:
LNK衔接蛋白在甲状腺未分化癌中的作用及机制
陈雪
摘要:我们之前的研究发现,白细胞和血小板水平与甲状腺未分化癌(ATC)的预后呈负相关。因此,推测造血调节基因可能参与TCA的进展。
衔接蛋白LNK(也称为SH2B3)是造血因子的上调基因,据报道与几种造血肿瘤密切相关。我们推测LNK可能参与ATC的出现和发展。
本研究的目的是探讨LNK在甲状腺未分化癌中的作用及其机制。
方法:采用实时荧光定量PCR检测甲状腺癌和细胞系组织中LNK mRNA的表达。使用分子克隆技术构建人LNK质粒pLKO。
外源过表达质粒1-LNK和LNK pcDNA3。
片段1-LNK,片段pMSCV-LNK;上述质粒用慢病毒/逆转录病毒包被以建立间变性甲状腺癌细胞系,其稳定地阻断内源/稳定的外源性LNK过表达。在确认实时PCR和Western印迹LNK靶基因的mRNA和蛋白表达水平后,使用MTT测定法检测细胞增殖能力的变化,并使用细胞克隆测定法。使用平板检测单个细胞的克隆能力的变化,并使用transwell迁移测定法检测迁移体积的变化;检查LNK相互作用蛋白质。co-IP测定用于验证蛋白质 - 蛋白质相互作用。为了检测细胞功能的变化,我们检测到过表达LNK细胞系中相互作用蛋白的减少。Western印迹用于检测相关途径中分子水平的变化。
结果:分化型甲状腺癌细胞和组织样本中LNK表达水平高于分化型甲状腺癌细胞。成功构建具有稳定的LNK减少/过表达的间变性甲状腺癌细胞系。细胞功能实验证实LNK可改善甲状腺未分化癌。细胞生长,克隆和迁移能力。14-3-3ε和14-3-3γ是与LNK直接相互作用的蛋白质,它们的相互作用通过co-PI实验证实,3-3用于作用已经发现可以抑制LNK的影响。来自甲状腺的未分化恶性肿瘤细胞。蛋白质印迹分析证实LNK可通过激活ERK1 / 2-Akt-NF-κB-Bcl-2 / Bcl-xLSu抗细胞凋亡能力来促进甲状腺未分化癌细胞,击倒14-3可以阻止这种效果。
结论:LNK通过激活ERK1 / 2 / Akt-NF-BB-Bcl-2 / Bcl与14-3-3ε/14-3-3γ通路结合,并对甲状腺未分化癌细胞具有抗凋亡作用。促进能力-xL.Y促进恶性生物学行为,如增殖和转移。
本研究结果为甲状腺未分化癌的治疗提供了新思路和新方向。
[补助单位]:昆明医科大学[年级]:硕士学位[奖励年份]:2017年[分类号]:R736
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